MÓDULO 1. MANIPULACIÓN DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 1. MANEJO Y MANIPULACIÓN DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN.
- Reconocimiento del comportamiento natural de las especies animales ante la manipulación.
- Aplicación de técnicas y uso de equipos de sujeción.
- Manejo de jaulas especiales para sujeción de animales. Características y funcionamiento.
- Técnicas de inmovilización manual de animales.
- Aplicación de métodos de sedación: tipos y características.
- Cumplimentado del libro de registro de entradas, salidas e incidencias de animales. Estructura y contenidos.
- Uso de las herramientas informáticas de gestión de colonias de animales.
UNIDAD DIDÁCTICA 2. TRANSPORTE DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN.
- Reconocimiento de la documentación de acompañamiento durante el transporte.
- Utilización de contenedores: tipos e identificación.
- Valoración de los requisitos de espacio por animal.
- Cuidados, nutrición e hidratación durante el transporte: tipos de alimento.
- Cuidados en la recepción de animales. Estrés del transporte.
- Control de los animales procedentes de otros centros: cuarentenas, documentación requerida previamente a la llegada de animales.
UNIDAD DIDÁCTICA 3. PREPARACIÓN DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN PARA SER UTILIZADOS EN PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES.
- Técnicas de socialización de los animales.
- Aplicación de los mecanismos de sujeción de los animales manuales y mecánicos.
- Aplicación de los métodos de eutanasia: objetivos, indicaciones, métodos aceptados.
MÓDULO 2. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES CON ANIMALES
UNIDAD FORMATIVA 1. INVESTIGACIÓN CON ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 1. UTILIZACIÓN DE ANIMALES COMO MODELOS EXPERIMENTALES
- Justificación de experimentación con animales de laboratorio:
- - Referencias históricas, momentos y personajes claves en la utilización de animales como modelos experimentales
- - Logros conseguidos en las ciencias biomédicas
- - Búsqueda de otras alternativas. Razones científicas y éticas
- Principio de las 3Rs:
- - Reducción
- - Refinamiento
- - Reemplazo
- Clasificación de los métodos alternativos:
- - Modelos computerizados de predicción «in silico»
- - Uso de organismos inferiores.
- - Uso de huevos
- - Métodos «in Vitro»
- - Otros
- Aspectos éticos y normativos de los cuidados proporcionados a los animales de experimentación.
- - Transformación, limitación y percepción social
- - Actitud del investigador frente al animal como sujeto
- - Reconocimiento del animal como reactivo biológico
- - Obtención de animales biológicamente estandarizados
- Normativa sobre protección de animales utilizados para experimentación y otros fines científicos: seguridad, administración, transporte, recepción, aprovisionamiento de animales y eliminación de los cadáveres.
- - Control social de la investigación
- - Legislación Nacional y Europea
- - Aspectos básicos de legislación
- - Objetivo de la legislación
- Normativa sobre: acreditación, elaboración y cumplimiento de los procedimientos de los laboratorios de ensayos clínicos.
- - Seguimiento de Protocolos Normalizados de Procedimientos
- Prevención de riesgos laborales en los procedimientos experimentales con animales:
- - Niveles de bioseguridad
- - Técnicas y prácticas de laboratorio
- - Equipos de seguridad biológica.
- Análisis de signos y comportamiento animal anómalos que interfieran en los procedimientos.
- - Detección del dolor, signos de sufrimiento y angustia de animales de experimentación, siguiendo Protocolos Normalizados de revisión
- - Conocimiento del aspecto normal de las distintas especies animales
- - Pautas de observación del animal: Aspecto exterior, sonidos, movimientos, comportamiento y relación social
- - Observación de la jaula o habitáculo, del lecho, cantidad de comida y agua ingerida, etc.
- - Determinación cualitativa de la alteración de parámetros fisiológicos: pérdida o aumento de peso, ritmo de la respiración, temperatura, etc.
UNIDAD DIDÁCTICA 2. ADMINISTRACIÓN DE SUSTANCIAS EN LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
- Administración de sustancias:
- - Soluciones a administrar, principales solventes.
- - Características de las soluciones, concentración, osmolaridad y pH.
- Clasificación de las vías de administración de sustancias:
- - Enteral
- - Parenteral
- - Tópica
- - Inhalatoria
- Factores para la elección de la vía:
- - Velocidad de absorción de sustancias
- - Tolerancia
- - Facilidad de su administración según recursos materiales y humanos
- Relación de material existente en el mercado:
- - Jeringas, conexiones, catéteres y sondas
- - Agujas: tipos y escala de medición
- - Bombas de infusión mecánicas y electrónicas
- - Bombas de infusión osmótica o volumétricas
- - Pomadas y geles
- - Vaporizadores y nebulizadores
- Selección del material necesario para la administración de sustancias en función de:
- - Sustancia a administrar.
- - Volumen
- - Especie animal
- - Vía de inoculación
- Volumen máximo de inyección según:
- - Especie animal
- - Vía de administración
- Inmovilización de los animales para la administración de sustancias.
- - Manejo e inmovilización minimizando estrés
- - Material de inmovilización
- Administración crónica de sustancias.
- - Sistemas de infusión continua: anclados y ambulatorios
UNIDAD DIDÁCTICA 3. OBTENCIÓN DE FLUIDOS Y TEJIDOS CORPORALES DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
- Extracción de sangre:
- - Volumen máximo de extracción, según vía y especie animal
- - Técnica de recogida de sangre
- Métodos de extracción de sangre, ventajas e inconvenientes:
- - Exanguinación
- - Decapitación
- - Del corazón
- - De venas
- - De arterias
- - Métodos no recomendados de venopunción
- - Obtención repetida de sangre: Cateterización
- Formas de obtención de otros fluidos corporales:
- - Heces y orina: jaulas metabólicas o sondas
- - Líquido cefalorraquídeo
- - Bilis
- - Linfa.
- - Líquido ascítico
- Realización de eutanasia
- - Definición y aspectos relacionados
- - Métodos de eutanasia adecuados según la especie y la experimentación
- - Identificación de equipos, instrumental y Materiales necesarios
- Asistencia a una necropsia:
- - Técnicas de necropsia siguiendo procedimientos establecidos
- - Preparación del instrumental y material necesarios
- - Recogida de muestras
- - Registro de datos
- Conocimiento de la normativa de:
- - Protección frente a agentes químicos, biológicos y radiológicos
- - Tratamiento y eliminación de residuos
- Acciones para una correcta gestión de residuos:
- - Segregación (recogida selectiva).
- - Transporte y almacenamiento en la instalación
- - Tratamiento previo a la eliminación
- - Eliminación del residuo en la instalación productora o gestor autorizado
UNIDAD DIDÁCTICA 4. REGISTRO DE DATOS DE INVESTIGACIÓN EN EXPERIMENTACIÓN ANIMAL
- Monitorización: determinación y registro de variables fisiológicas
- - Exploración clínica: observación palpación y auscultación
- - Uso de equipos: Métodos invasivos y no invasivos
- Análisis de los resultados obtenidos en un procedimiento experimental
- - Uso de programas informáticos específicos para el procedimiento experimental.
- - Análisis estadístico en función del tipo de parámetro
- Registro de tratamientos o de administración de sustancias y de obtención de muestras.
- - Establecimiento previo al procedimiento del sistema de recogida de datos
- - Características de un registro de datos: escrito o automatizado, duradero (copias de seguridad), completo, accesible, hojas específicas o bases de datos debidamente confeccionadas según datos, normalizados, establecer responsable de la conservación del archivo, etc.
- Clasificación de los sistemas de instrumentación según sus objetivos:
- - De adquisición de la información
- - Diagnósticos
- - De evaluación
- - De monitorización y control
- Identificación de los componentes del sistema global animal-instrumento:
- - Animal: diferentes generadores de señales
- - Estímulos: Visuales, acústicos, táctiles, eléctricos, etc.
- - Transductor: sensibilidad, linealidad, respuesta en frecuencias (lineal, integrador y diferenciador) y rendimiento
- - Equipo de tratamiento o procesado de una señal
- - Equipo de presentación, lectura o registro: registros mecánicos o electrónicos
- - Equipo de control automático de los estímulos, de los transductores, etc.
- Problemas y soluciones en la medición de la actividad de los seres vivos:
- - Inaccesibilidad de las variables
- - Variabilidad de los datos
- - Interrelaciones entre variables
- - Interacción entre órganos y sistemas
- - Efecto del transductor sobre la medición a realizar
- - Artefactos en las medidas
- - Limitaciones de la energía
- Utilización de transductores para la medida de las principales variables biológicas:
- - Temperatura
- - Fuerza, desplazamiento, velocidad y aceleración
- - Presión sanguínea
- - Volumen y presión respiratoria
- - Flujo en gases
- - Flujo en líquidos
- Medición de señales biológicas por biotelemetría:
- - Objetivo
- - Ventajas
- - Componentes de un sistema de biotelemetría
- Utilización de procedimientos no quirúrgicos con equipos específicos de estudio o medida de variables:
- - Diagnóstico por imagen.
- - Telemetría
- - Estudios de comportamiento
- - Pletismografía
- - Otros métodos no invasivos
UNIDAD FORMATIVA 2. ANESTESIA Y ANALGESIA EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 1. ANESTESIA DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
- Anestesia: Definición y objetivos.
- Componentes de la anestesia general y su influencia en los resultados experimentales:
- - Hipnosis o sueño
- - Analgesia o ausencia de dolor
- - Relajación muscular
- - Bloqueo de la actividad refleja
- - Anestésico ideal
- Elección de la técnica anestésica en función de:
- - La especie animal
- - Estado del animal y objetivo de la investigación
- - Tipo de procedimiento
- - Duración del procedimiento
- - Experiencia del técnico y equipo disponible
- Establecimiento de las fases de una técnica anestésica:
- - Ayuno
- - Preanestesia. Tranquilizantes y anticolinérgicos.
- - Anestesia. Inducción y mantenimiento anestésicos
- - Postanestesia
- Administración de anestésicos inyectables:
- - Fármacos y dosis de los mismos
- - Vías y modo de administración
- Administración de anestésicos inhalatorios:
- - Equipamiento
- - Tipos de anestésicos inhalatorios
- - Eliminación de gases anestésicos.
- Medidas de soporte durante la anestesia:
- - Intubación endotraqueal e instauración de ventilación artifical
- - Implantación de una vía venosa permanente
- Recuperación anestésica:
- - Pautas para una recuperación normal
- - Reversión de la anestesia, utilización de antagonistas
- Monitorización de:
- - El plano anestésico. Respuesta refleja.
- - La oxigenación, circulación y ventilación durante la anestesia.
- - La temperatura.
- Identificación de las principales complicaciones anestésicas y su tratamiento.
- - Extrapolación de una especie a otra
- - Adecuación de la profundidad anestésica a las necesidades de la cirugía
- - Utilidad de anestesia inhalatoria
UNIDAD DIDÁCTICA 2. ANALGESIA DE LOS ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
- Analgesia: Definición y ventajas de su utilización
- Reconocimiento y evaluación del dolor:
- - Escalas de severidad (gravedad o intensidad de dolor)
- - Signos clínicamente valorables: cambios en la actividad, aspecto, temperatura, ingesta, variables fisiológicas y vocalizaciones.
- Técnicas de analgesia:
- - Principales fármacos analgésicos
- - Analgesia polimodal o multimodal
- - Analgesia preventiva
- - Analgesia local y regional
UNIDAD FORMATIVA 3. TÉCNICAS QUIRÚRGICAS BÁSICAS EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 1. PREPARACIÓN DE LA CIRUGÍA EN EXPERIMENTACIÓN ANIMAL
- Planificación de la cirugía:
- - Elección y disponibilidad de los animales
- - Valoración preoperatoria del estado sanitario del animal
- - Preparación del animal
- - Comprobación de la disponibilidad de instalaciones quirúrgicas y pre- y post-operatorias
- - Elección y preparación del instrumental quirúrgico, aparatos y accesorios
- - Preparación del cirujano
- Selección del material quirúrgico:
- - Agujas quirúrgicas.
- - Material de sutura. Sutura absorbible y no absorbible.
- - Otros accesorios quirúrgicos.
- Anatomía y fisiología general de órganos y sistemas de los animales de laboratorio.
- - Datos anatómicos, fisiológicos y biológicos de los animales más utilizados en investigación
UNIDAD DIDÁCTICA 2. APLICACIÓN DE TÉCNICAS QUIRÚRGICAS BÁSICAS EN PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
- Conocimiento de técnicas quirúrgicas básicas en experimentación animal:
- - Corte de la piel y otros tejidos
- - Control del sangrado y de la desecación de tejidos y órganos
- - Técnicas y nudos de sutura
- Aprendizaje de las técnicas quirúrgicas más comunes en la rata:
- - Laparotomía
- - Accesos a grandes vasos: vena yugular y arteria carótida
- - Ovariohisterectomía
- - Cesárea
- - Castración: ovariectomía y orquiectomía
- Procedimientos quirúrgicos de obtención de muestras biológicas.
- - Extracción de tejidos sólidos y realización de una biopsia.
- - Perfusión de tejidos y órganos.
- Supervisión y cuidados postoperatorios:
- - Cuidados de la herida
- - Complicaciones quirúrgicas postoperatorias
- Protocolos de supervisión y determinación de criterios de punto final postquirúrgico de los animales.
- - Supervisión diaria de la herida, desinfección y empleo de antibióticos.
- - Utilización de analgesia postoperatoria
- - Aplicación diaria de escalas de severidad
- - Determinación del punto final y eutanasia
MÓDULO 3. TÉCNICAS DE REPRODUCCIÓN EN ANIMALES UTILIZADOS EN PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES
UNIDAD FORMATIVA 1. REPRODUCCIÓN Y CRÍA DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 1. REPRODUCCIÓN ANIMAL
- Anatomía del aparato reproductor masculino:
- - Esquema del aparato reproductor masculino en mamíferos
- - Órganos, conductos y vías, vesículas y glándulas
- Fisiología reproductiva masculina:
- - Desarrollo y funcionamiento del aparato reproductor
- - Espermatogénesis, almacenamiento y maduración de los espermatozoides
- Anatomía del aparato reproductor femenino:
- - Esquema del aparato reproductor femenino en mamíferos
- - Órganos y conductos
- - Características anatómicas en las distintas especies de animales de experimentación
- Fisiología reproductiva femenina:
- - Desarrollo y funcionamiento del aparato reproductor
- - Oogénesis y ovulación
- - Diferencias en la ovulación según la especie: espontánea o inducida
- Características reproductoras de los principales animales de laboratorio
- - Vida fértil y edad óptima de cruce
- - Periodo de gestación
- - Celo postparto
- - Pseudogestación
- - Efecto Witten (sincronización del celo)
- - Efecto Bruce
- Fisiología del celo, cubrición y gestación:
- - Ciclo estral. Fases del ciclo
- - Hembras poliestricas (anuales y estacionales), biestricas y monoestricas
- - Cambios fisiológicos y comportamiento de las hembras durante el celo
- - Influencia en la conducta sexual de los factores: Sociales, ambientales y fisiológicos
- - Duración del celo y aspectos relacionados con la cubrición según especie animal
- - Comprobación de la cópula: frotis vaginal o visualización del tapón vaginal
- - Dónde y cómo se produce la fecundación. Formación del zigoto
- - Fases de la gestación: huevo, embrión y feto
UNIDAD DIDÁCTICA 2. GESTIÓN DE COLONIAS DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
- Poblaciones naturales y de laboratorio.
- - Definición de poblaciones naturales y artificiales
- - Elementos de genética de poblaciones. Selección de los progenitores
- - Frecuencias génicas y genotípicas. Ley de Hardy-Weinberg
- Cría de animales de experimentación.
- - Sistemas de cruce: monogámico, poligámico y harén
- - Ventajas e inconvenientes de los distintos sistemas de cruce
- Protocolos de cruzamiento:
- - Obtención de animales consanguíneos o Inbred: Programa de líneas paralelas o programa de línea simple
- - Obtención de animales no consanguíneos u Outbred: Sistema Robertson y Sistema Rotativo o de Poiley
- - Sistema al azar
- - Programas de cría de registro y control informatizados de las colonias de animales
- Destete de animales de las especies utilizadas con mayor frecuencia en investigación.
- - Tamaño de la camada
- - Sexado
- - Edad y peso al destete
- - Realización de los lotes
- - Etiquetado
- Cría de animales transgénicos.
- - Elección de los progenitores, gestión informatizada, genotipado y crioconservación
- Organismos modificados genéticamente (OMG).
- - Legislación y normativa actualizada sobre la utilización de OMG
- - Precauciones y medidas de contención de animales modificados genéticamente según la especie
UNIDAD DIDÁCTICA 3. GENÉTICA DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO
- Estandarización genética.
- - Calidad del animal de experimentación: Interacción genotipo-ambiente
- - Causas que justifican el control de la pureza genética: Mutaciones espontáneas e interacción accidental con otra cepa
- - Prevención del control de la pureza genética: congelación de embriones y aislamiento físico
- Factores que afectan la composición genética de las poblaciones de laboratorio:
- - Selección genética de los animales.
- - Consanguinidad: concepto, aplicaciones, consecuencias en los animales.
- - Deriva y variabilidad genética: Definición y consecuencias en la colonia.
- Animales homocigóticos y heterocigóticos:
- - Manifestación de un Knock-out en homocigosis
- - Mantenimiento de líneas transgénicas en heterocigosis y genotipado para detección de homocigóticos
- Categorías de animales de laboratorio en función de su constitución genética.
- - Características de las líneas consanguíneas
- - Líneas genéticamente estandarizadas: Líneas consanguíneas, Híbridos F1, coisogénicas, congénitas, consanguíneas recombinantes (RIS), congénitas recombinantes (RCS), consómicas y conplásticas. Líneas no consanguíneas
- - Influencia de la genética sobre los resultados experimentales
- - Aplicaciones específicas en investigación de las distintas categorías genéticas
- Nomenclatura e identificación de animales. Reglas de nomenclatura internacional
- - Nomenclatura de las líneas consanguíneas.
- - Nomenclatura de las líneas coisogéncas y congénitas
- - Nomenclatura de las líneas consanguíneas recombinantes
- - Nomenclatura de las líneas cogénicas recombinantes
- - Nomenclatura de los ratones knock-out
- - Nomenclatura de los roedores no consanguíneos
- Transgénesis y mutagénesis dirigida:
- - Técnicas de obtención de animales transgénicos: Método de microinyección y Método del retrovirus
- - Técnicas para generar mutaciones heredables en ratón
- - Creación de ratones Knock-out
- Genotipado y fenotipado.
- - Detección de la alteración genética mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR)
- - Equipos para PCR: termocicladorres
- - Identificación del individuo
- - Bases de datos fenotípicas internacionales
- - Métodos de control de la pureza genética de los animales de experimentación:
- - Marcadores bioquímicos
- - Marcadores Inmunológicos
- - Análisis del color del pelaje
- - Injertos de piel
- - Caracteres reproductivos
- - Marcadores de ADN. Fingerprinting de ADN. Análisis de microsatélites por PCR. Otras técnicas moleculares
- Bases de datos y bancos de animales transgénicos. Gestión a través de programas informáticos
- - Registro de información individualizada de: Construcción, línea, generación, genotipo, sexo, color, edad, identificación, caracterización fenotípica, progenitores (genealogías), investigación de destino y responsable
UNIDAD FORMATIVA 2. REPRODUCCIÓN ASISTIDA EN ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
UNIDAD DIDÁCTICA 1. TÉCNICAS NO NATURALES DE REPRODUCCIÓN
- Obtención de gametos y embriones:
- - Lavado del epidídimo y los vasos deferentes y esperma eyaculado (lavaje de los cuernos uterinos)
- - Lavado de oviducto y útero
- - Conservación de espermatozoides, ovocitos y embriones
- Técnicas de reproducción asistida:
- - Ventajas e inconvenientes de la inseminación artificial y la fertilización in vitro
- Técnicas de la Inseminación artificial:
- - Inseminación por vía vaginal
- - Inseminación por vía uterina
- - Transferencia del esperma dentro del oviducto por procedimiento quirúrgico
- Etapas de la Inseminación artificial:
- - Elección de las hembras con elevado índice de fertilidad
- - Protocolo de superovulación
- - Sincronización del celo - Inseminación al comienzo del estro
- - Cruce de hembras con machos vasectomizados - pseudogestación
- Etapas y técnica de la fecundación in Vitro (FIV):
- - Medios de cultivo de los gametos, incubación y fecundación
- - Factores que influyen en la probabilidad de fecundación
- - Selección y sistemas de control de embriones
- - Transferencia de embriones: Implantación quirúrgica de los óvulos fecundados
- Rederivación de embriones:
- - Objetivo: Mejorar la calidad sanitaria de los animales
- - Protocolo de rederivación: Superovulación, fertilización natural y transplante de los embriones a una hembra pseudopreñada
UNIDAD DIDÁCTICA 2. CONSERVACIÓN Y CRIOPRESERVACIÓN DE GAMETOS Y EMBRIONES
- Fundamentos de criobiología.
- - Principios físicos: temperatura y cambios de estado
- - Principios químicos: composición de los crioprotectores
- - Principios biológicos: diferencias entre células, tejidos o especies
- Equipos y medios de crioconservación.
- - Equipos de congelación: baños de alcohol, tanques de nitrógeno, congeladores programables, pajuelas, etc.
- - Dos enfoques para la criopreservación: la congelación controlada (lenta y rápida) y la vitrificación (congelación ultra-rápida)
- - Medios (crioprotectores): elección y concentración del medio en función de la técnica
- Objetivos y ventajas de la criopreservación de gametos y embriones:
- - Prevención de la contaminación genética
- - Limitación de la deriva genética por la variación en la frecuencia de los genes
- - Mantenimiento de líneas transgénicas y mutantes a largo plazo
- - Reducción de costes
- - Control de las patologías asociadas al mantenimiento animales vivos
- Ventajas e inconvenientes de la crioconservación de espermatozoides o embriones:
- - Tiempo
- - Coste
- - Recursos materiales
- Crioconservación de gametos y embriones.
- - Congelación de esperma: crioprotectores, temperaturas y tiempos específicos
- - Estrategias de congelación de oocitos: en estado inmaduro (en forma de vesícula germinal) y en estado maduro (después de la ovulación) bajo la forma de oocitos en metafase II, con mayor eficacia.
- - Embriones: estadío-eficacia del sistema
- - Sistemas de identificación, registro y mantenimiento de gametos y embriones criopreservados, bancos de embriones y gametos congelados
- - Medidas preventivas y de protección durante el manejo de productos para la criopreservación.
- - Control de calidad.
MÓDULO 4. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES CON ÓRGANOS AISLADOS, TEJIDOS Y CÉLULAS DE ANIMALES
UNIDAD DIDÁCTICA 1. CULTIVOS DE CÉLULAS, TEJIDOS Y ÓRGANOS PROCEDENTES DE ANIMALES
- Histología y fisiología celular básica.
- - Concepto de morfología y fisiología
- - Niveles de organización. Relación entre estructura y función
- - Clasificación de los tejidos
- Proliferación y diferenciación celular. Adhesión celular.
- - Concepto de proliferación y diferenciación celular (especialización)
- - Factores reguladores: Señales endógenas y exógenas
- - Contacto directo célula-célula. Moléculas de adhesión
- Tipos de células básicas y características tanto morfológicas como fisiológicas.
- - Célula procariota: estructura y funciones básicas
- - Célula eucariota: Organización, estructura y función de los diferentes orgánulos celulares, organización función del núcleo.
- - Descripción de algunos tipos de células que se suelen utilizar en cultivos celulares: tumorales, epiteliales, Tejido conjuntivo, Tejido muscular, Tejido nervioso, Sangre, tejidos linfoides y Células madre.
- Métodos alternativos al empleo de animales en investigación.
- - Ventajas de los ensayos in vitro: Ética y legislación, Control del medio extracelular, Homogeneidad de la muestra, Disminución del gasto y tiempo, objetivables y cuantificables, precisión, reproducibilidad, etc.
- - Limitaciones: Excesiva sensibilidad, Límite de producción, Inestabilidad, Validación del modelo, etc.
- Obtención de células. Cultivos celulares primarios. Obtención de una línea celular.
- - Sistemas para la obtención de células: Banco de células o aislamiento a partir de un tejido
- - Métodos de aislamiento del tejido, disección/disgregación
- - Requisitos especiales para el cultivo de células primarias
- - Ventajas e inconvenientes de la utilización de células primarias.
- - Conservación o mantenimiento células primarias. Requisitos especiales para el cultivo de células primarias.
- Evolución de las líneas celulares y líneas celulares inmortalizadas. Desarrollo de líneas celulares continuas.
- - Tipos de líneas celulares establecidas. Células en monocapa y células en suspensión. Células inmortalizadas y transformadas
- - Preparación de las líneas.
- - Control de los cultivos celulares (pH, sobrecrecimiento, estado del medio, contaminación, etc.)
- - Recuento de células. Preparación de células en suspensión y de células adherentes. Uso del hemocitómetro.
- - Subcultivos de células. Curva de crecimiento.
- - Métodos para aumentar la producción.
- - Ventajas y desventajas de la líneas celulares estables
- Bases de datos y bancos de líneas celulares y material biológico:
- - Qué es un banco de células
- - Bancos internacionales más importantes: American Type Culture Collection (ATCC) y European Collection of Cell Cultures (ECACC), etc.
- - Otros bancos de células: Banco Nacional de Líneas Celulares, etc.
- Anatomía básica de órganos y tejidos empleados en investigación in vitro.
- - Órganos y tejidos más comunes: hígado, corazón, riñón, páncreas, branquias, encéfalo, piel, sangre, etc
- - Ingeniería de tejidos
- Modelos con órganos y tejidos para procedimientos in vitro:
- - Cultivo y baños de órganos
- - Órganos perfundidos
- - Explantes de órganos
- - Órganos reconstituidos
- - Ventajas e inconvenientes de los diversos tipos de modelos in vitro
- Cultivos de órganos:
- - Disección de órganos y tejidos para su extracción.
- - Baños de tejidos y órganos. Equipamiento y medios de conservación.
- - Obtención de explantes. Tamaño de la muestra, Perfusión de la muestra y equipamiento
UNIDAD DIDÁCTICA 2. MANIPULACIÓN DE CULTIVOS CELULARES Y CRIOPRESERVACIÓN
- Equipos y material empleados en los cultivos de células y su mantenimiento:
- - Cabinas de flujo laminar: tipos (vertical y horizontal) y nivel de protección (clase I, II y III)
- - Incubadores: mantenimiento del nivel de CO2, temperatura y humedad
- - Microscopios: Estándar e invertidos con ópticas de contraste de fases
- - Frigoríficos, congeladores (de -20º y -80º C) y equipo de criogenia (unidad de almacenamiento en nitrógeno líquido (-196º C) de líneas celulares)
- - Equipos de esterilización y filtración: autoclaves, esterilización por gas, por calor seco, sistema de filtración, purificación de agua, etc.
- - Otros instrumentos: Balanzas, Baño termostático, centrífugas refrigeradas y no refrigeradas, Equipos de purificación de agua, Micropipetas de volumen variable o de volumen fijo, pHmetro, Pipeteadores automáticos
- - Recipientes para cultivos: Placas de Petri, Multiplacas, Frascos de Roux de diferentes formas y tamaños o Especiales, como las «roller bottles» o con portaobjetos
- Protocolos de trabajo en cabina de flujo laminar y en poyata de laboratorio.
- - Inicio del trabajo en cabina: encendido y puesta a punto de la cabina, desinfección y recomendaciones para el trabajador.
- - Durante la manipulación: distribución del material y utilización de la zona de trabajo, control del flujo y turbulencias de aire, actuación ante un vertido de material contaminado y alarmas.
- - Al finalizar el trabajo: Limpieza, vaciado de material, apagado y cerrado de la cabina
- - Mantenimiento: semanal (limpieza y desinfección de superficie y paredes, mensualmente (revisión de válvulas interiores) y anualmente se certificará por una entidad cualificada.
- - Mesa de trabajo o poyata de laboratorio: orden, limpieza y desinfección
- Protocolos de manejo de placas de cultivos.
- - Apertura del material estéril dentro de la cabina
- - Marcaje de las placas en la tapa y en un lateral de la base, de manera distinta para cada placa, para evitar intercambiar tapas.
- - Toma del medio con la pipeta y transferencia a la placa entreabierta (no retirar la tapa)
- - Tratamiento como residuo según riesgo biológico del cultivo
- Áreas de un laboratorio de cultivo de tejidos.
- - Área de preparación de medios: equipamiento
- - Área de limpieza y esterilización: dimensiones mínimas, organización y equipamiento (máquinas de lavado de material y esterilizadores)
- - Área de transferencia: cabina de flujo laminar/seguridad biológica y otros equipos
- - Área de incubación o cámaras de crecimiento: control de iluminación, temperatura y humedad. Alarmas
- Lavado, esterilización y preparación de materiales:
- - Vidrio: pipetas, probetas, vasos, matraces y botellas de vidrio para preparación, almacenamiento y clasificación de medios y reactivos
- - Plástico: Cultivos en placas y botellas, tubos de ensayo para diferentes técnicas y preparación de alícuotas de los reactivos
- - Lavado, preparación y esterilización del material: área específica del laboratorio, con el método y desinfectantes adecuados
- - Métodos de esterilización: Calor directo, flameado; Calor seco, Horno Pasteur y Calor Húmedo, Autoclave
- Contaminaciones cruzadas y microbiológicas y su prevención.
- - Principales contaminantes: microorganismos, otras líneas celulares del laboratorio y contaminación química
- - Fuentes de la contaminación accidental: origen del cultivo tejido o células, proceso de manipulación del cultivo, empleo de reactivos biológicos contaminados, material contaminado y ambiente de trabajo
- - Prevención para evitar contaminaciones: obtener siempre los cultivos de centros reconocidos que certifiquen el origen; trabajar bajo unas correctas normas de trabajo, limpieza y esterilidad, utilización de Inhibidores del crecimiento de los contaminantes (antibióticos y antifúngicos), etc.
- Características y naturaleza del sustrato en cultivos celulares.
- - Tipos de sustratos
- - Factores de adhesión celular
- - Interacciones células-substrato: Medios semisólidos: matrices.
- - Métodos de disgregación celular: mecánicos, químicos y enzimáticos
- Medios y reactivos de cultivo celular. Características principales, preparación y renovación.
- - Características de los medios de cultivo celular: composición, osmoralidad, viscosidad, tensión superficial, especificidad, pH, capacidad tamponadora, esterilidad, etc.
- - Componentes y suplementos: Agua, sales, glucosa, aminoácidos y vitaminas. Suero, factores de crecimiento y otros suplementos específicos. Indicador de pH. Pautas par el suplemento con antibioticos
- - Tipos de medios. Medios libres de suero.
- - Opciones para la elección, en polvo, líquido concentrado o listo para usar
- - Preparación de medios líquidos, a partir de polvo (filtración) o esterilizados en autoclave
- - Opciones para la elección, en polvo, líquido concentrado o listo para usar
- - Preparación de medios líquidos, a partir de polvo (filtración), concentrados o esterilizables en autoclave
- Factores de crecimiento y supervivencia de células en cultivo.
- - Hormonas y factores de crecimiento
- - Suero. tipos; suero de ternera (CF), suero bovino fetal (FCS) el suero de caballo (HS) y suero humano (HuS). Sustitutivos del suero
- - Factores que afectan a la supervivencia de las células en un cultivo
- Técnicas de mantenimiento de células en cultivo. Criopreservación de líneas celulares y métodos de identificación. Productos de criopreservación celular.
- - Proceso de almacenamiento por congelación con agentes crioconservantes (glicerol, DMSO,...).
- - Disminución progresiva de temperaturas hasta utilizar depósitos con nitrógeno líquido. Sistemas automáticos para la reducción progresiva y controlada de la temperatura.
- - Factores que se favorecen con la criopreservación
- - Identificación: Datos mínimos de indentificación de cada vial
- - Procedimiento de descongelación
- Empleo de cultivos celulares con fines experimentales. Detección de actividad metabólica y toxicológica.
- - Aplicaciones: estudio de las propias células, clonación, el cáncer, biología del desarrollo, investigación en biología celular y bioquímica, en farmacología y toxicología, obtención de anticuerpos u hormonas, técnicas diagnósticas, etc.
- - Ventajas de la utilización de cultivos celulares en el campo de la toxicidad
- - Limitaciones de los ensayos in Vitro para estudios de toxicidad
- - Ensayos utilizados en pruebas de citotoxicidad: Pruebas citológicas: observación al microscopio, Pruebas bioquímicas. Pruebas de viabilidad (de respuesta inmediata o de corto plazo y de respuesta a largo plazo o de supervivencia)
- - Células asesinas
- - Requisitos de las pruebas de citotoxicidad
- - Preparación de las células efectoras y diana
- - Prueba de citotoxicidad
- - Resultados e interpretación
UNIDAD DIDÁCTICA 3. PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES CON ÓRGANOS AISLADOS, TEJIDOS Y CÉLULAS ANIMALES
- Experimentos con cultivos de tejidos de origen animal mediante su exposición a sustancias o elementos terapéuticos o tóxicos.
- - Estudios del efecto de diferentes sustancias en cultivos con tejidos y órganos diana. Aplicaciones
- - Estudios del efecto de diferentes sustancias en cultivos de células (primarias o líneas establecidas). Aplicaciones
- Técnicas de valoración del crecimiento y la viabilidad celular.
- - Rojo neutro
- - Prueba MTT
- - Liberación al medio de la láctico deshidrogenasa (LDH)
- - Ensayos de fluorescencia
- - Toxicidad relativa: (concentración efectiva en el 50 % de las células)
- Recolección de células y sus productos.
- - Recolección de las células de los cultivos: centrifugación continua o filtración y extracción en régimen continuo
- - Sistemas cromatográficos para el aislamiento y purificación de las toxinas. Equipos relacionados
- Prevención de riesgos laborales en la manipulación de órganos, tejidos y células.
- - Principales riesgos biológicos
- - Evaluación de riesgos: Propiedades intrínsecas del cultivo celular, como resultado de la modificación genética, como resultado de una infección con agentes patógenos. Condiciones de trabajo
- - Normas de trabajo en los laboratorios de cultivos celulares
UNIDAD DIDÁCTICA 4. INSTRUMENTACIÓN Y MÉTODOS DE REGISTRO DE SEÑALES A PARTIR DE ÓRGANOS AISLADOS, TEJIDOS Y CÉLULAS ANIMALES
- Procesamiento de señales:
- - Esquema general: transductor, amplificador y sistema de registro
- - Equipos de espectroscopia de Bioimpedancia eléctrica
- - Equipos de medida de la biomasa
- Transductores: de fuerza, de presión, de temperatura.
- Electrodos para biopotenciales y bioquímicos.
- Ruidos en la salida de datos y métodos de filtrado.
- Programas informáticos de recogida de datos.
MÓDULO 5. ANÁLISIS DE LABORATORIO EN MUESTRAS BIOLÓGICAS ANIMALES
UNIDAD DIDÁCTICA 1. MANIPULACIÓN, PROCESAMIENTO, CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLÓGICAS ANIMALES
- Materiales y equipos básicos del laboratorio de análisis clínicos.
- - Generales: agitadores, homogeneizadores, centrífugas, balanzas, pipetas, dispensadores, baños termostáticos, incubadoras, autoclaves, estufa, pHmetros, entre otros
- - Análisis químicos: cromatógrafos, espectrómetros, HPLC
- - Análisis bioquímicos: analizadores automatizados, espectrofotómetros
- - Análisis hemáticos: hemocitómetros, lupas, coagulómetros, tromboelastógrafos,
- - Análisis microbiológicos: cabinas de cultivos, incubadoras, estufas
- - Organización general de un laboratorio y de sus secciones
- Reactivos de laboratorio.
- - Disolventes
- - Anticoagulantes
- - Tampones
- - Fijadores
- - Alcoholes
- - Tinciones
- Material de protección, seguridad y contenedores para eliminación de residuos.
- - Equipos de protección individual y colectivos (EPIs, cabinas, SAS, presión diferencial)
- - Protocolos de actuación. Normativa específica relativa a la gestión de residuos biosanitarios.
- - Tipos de contenedores.
- - Eliminación selectiva de residuos.
- Operaciones básicas de laboratorio.
- - Preparación de disoluciones y diluciones.
- - Resolución de problemas.
- - Centrifugación de muestras.
- Tipos de muestras: sangre, orina, LCR, semen, exudados u otros.
- - Métodos de obtención.
- - Métodos de conservación.
- - Métodos de procesado.
- Parámetros comunes analizables en las muestras biológicas.
- - Óptico (macros y microscópico)
- - Químicos
- - Bioquímico y hematológico
- Procesamiento de muestras en función de las mismas.
- - Según el origen y objetivo
- - Fraccionamiento
- - Conservación
- Análisis cuantitativo y cualitativo.
- - Analizadores
- - Técnicas cuantitativas
- - Técnicas cualitativas
- Determinación analítica. Batería de pruebas.
- - Disolventes
- - Anticoagulantes
- - Tampones
- - Fijadores, alcoholes
- - Tinciones
- Errores de manipulación.
- - Físicos
- - Químicos
- - Humanos
- - Biológicos
UNIDAD DIDÁCTICA 2. ESTUDIO DE MUESTRAS ANIMALES DE SANGRE, ORINA, HECES Y OTROS FLUIDOS CORPORALES
- Estudio de la sangre.
- - Características generales de la sangre.
- - Elementos formes, plasma y suero. Morfología de los elementos celulares de la sangre. Órganos y tejidos hematopoyéticos.
- - Factores que condicionan la muestra
- - Hematopoyesis. Características del plasma. Proteínas plasmáticas.
- - Hemostasia y coagulación.
- - Recomendaciones preanalíticas en el manejo de sangre
- - Obtención de muestras de sangre para estudio: citológico, de coagulación, parasitológico, bioquímico, inmunológico y microbiológico
- - Parámetros analizables a partir de una muestra sanguínea
- - Principios de fisiopatología de la sangre
- Estudio de la orina.
- - Características generales de la orina.
- - Obtención de una muestra de orina para: estudio rutinario, cuantificación de sustancias o elementos formes y microbiológico
- - Fisiopatología de la orina. Análisis de rutina de la orina.
- - Estudio del sedimento urinario. Otras determinaciones analíticas en orina.
- - Errores que pueden alterar los resultados. Interpretación de resultados.
- Estudio de las heces.
- - Características generales de las heces.
- - Obtención de una muestra de heces para: detección de sangre oculta, sustancias o elementos formes, análisis microbiológico y parasicológico
- - Análisis de muestras fecales. Fisiopatología de las heces.
- - Determinaciones de laboratorio en el estudio de las muestras fecales.
- - Errores que pueden alterar los resultados. Interpretación de resultados.
- Estudio de otros fluidos corporales:
- - Métodos de obtención y manejo de muestras de: semen, saliva, mucosas, exudados y otros líquidos orgánicos (líquido cefalorraquídeo, peritoneal, pleural, articular, etc.).
UNIDAD DIDÁCTICA 3. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS ANIMALES PARA SU ESTUDIO ANATOMO-PATOLÓGICO
- Tipos de muestras para el estudio anatomo-patológico.
- - Frescas, conservadas,…
- - Procesado, tinción, conservación
- Métodos y técnicas para la obtención de las muestras.
- - Punción Aspiración con Aguja Fina (PAAF).
- - Biopsia
- - Asepsia
- Procesamiento de muestras para estudio histológico. Instrumentos y materiales utilizados.
- - Automatizado o manual (corte, deshidratación, inclusión, fijación)
- - Equipos (micrótomos, baños, microscopios…)
- Procesamiento de muestras para estudio citológico. Instrumentos y materiales utilizados.
- - Deshidratación (química, térmica,…)
- - Fijación (química, térmica, …)
- - Tinción
UNIDAD DIDÁCTICA 4. PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES EN EL LABORATORIO DE ANÁLISIS DE MUESTRAS ANIMALES
- Factores de riesgo en el manejo de muestras biológicas.
- - Biológicos
- - Físicos
- - Químicos
- Legislación sobre prevención de riesgos laborales y sobre gestión de residuos.
- - Legislación y normativa actualizada sobre clasificación, envasado y etiquetado de preparados peligrosos
- - Legislación y normativa actualizada sobre la declaración de sustancias nuevas y clasificación, envasado y etiquetado de sustancias peligrosas
- - Legislación y normativa actualizada sobre el Reglamento de almacenamiento de productos químicos y sus instrucciones técnicas complementarias
- Medios de protección personal en el laboratorio y medidas de higiene.
- - Medidas generales relativas al local
- - Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- - Reglas de higiene personal
- - Revisiones médicas del personal
MÓDULO 6. ANÁLISIS DE BIOLOGÍA MOLECULAR EN MUESTRAS BIOLÓGICAS
- UNIDAD FORMATIVA 1. TÉCNICAS DE SEPARACIÓN DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS DE MUESTRAS BIOLÓGICAS
UNIDAD DIDÁCTICA 1. OBTENCIÓN, MANIPULACIÓN Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ANÁLISIS DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS
- Tipos de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.
- - Extracción de ADN (a partir de sangre, tejidos o células en cultivo, células bucales,…)
- - Extracción de ARN (mediante tiocianato de guanidina, urea-cloruro de lítio, purificación de poli(A)-ARN,
- Determinación analítica. Perfil analítico. Cartera de servicios.
- - Determinación de ácidos nucleicos
- - Separación analítica y preparativa del ADN (electroforesis analítica, geles de agarosa, …)
- Errores más comunes en la manipulación de las muestras.
- - Identificación y etiquetado de las muestras
- - Contaminación (por RNAsas, DNA,…)
- - Degradación enzimática
- Características generales de la obtención y procesamiento de muestras para análisis de ADN, ARN y proteínas.
- - Obtención de ADN y ARN a partir de tejidos líquidos (anticoagular)
- - Inhibidores RNAsas
- Prevención de riesgos en la obtención, manipulación y procesamiento de muestras biológicas.
- - Recepción o toma de muestras. Medidas preventivas
- - Precauciones generales relativas al laboratorio
- - Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- - Reglas de higiene personal
UNIDAD DIDÁCTICA 2. CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLÓGICAS PARA ANÁLISIS DE ADN, ARN Y PROTEÍNAS
- Etiquetado e identificación de las muestras.
- Sistemas y formatos de archivos. Sistemas de almacenamiento.
- Equipos de almacenamiento (-20ºC, - 80º C)
- Transporte de muestras (ADN: descongeladas, tubos estabilizadores ARN, tiempo de transporte recomendado 72 horas. ARN, congelado mediante agentes crioprotectores y con inhibidores de ARNAsas).
- Prevención de riesgos en la conservación y transporte de muestras biológicas.
- - Precauciones durante el desarrollo del trabajo
- - Reglas de higiene personal
- - Almacenamiento de muestras biológicas. Zonas de acceso restringido. Contenedores específicos. Manejo con EPIs
- - Transporte de material biológico. Sistema básico de embalaje. Identificación
UNIDAD DIDÁCTICA 3. BIOLOGÍA MOLECULAR: ADN, ARN Y PROTEÍNAS
- Composición molecular, estructura y función de los ácidos nucleicos.
- - Composición química y estructura de los ácidos nucleicos: Nucleótidos de importancia biológica y Factores que estabilizan la doble hélice
- - Funciones de los ácidos nucleicos
- Descripción de las enzimas asociadas a los ácidos nucleicos.
- - Endonucleasas (Tipo 1 y 2)
- - Polimerasas
- - Ligasas
- - Nucleasas
- - Fosfatasas
- - Quinasas
- - ARNasas
- Replicación del ADN.
- - Modo semiconservativo
- - Horqueta de replicación
- - Enzimas que intervienen en el proceso
- - Molécula accesoria: Iniciador
- Transcripción del ADN y su control.
- - Proceso: Cadena molde o antisentido. ARNm o transcripto primario. Enzima que dirige: polimerasa de ARN
- - Modificaciones postranscripcionales.
- Mecanismos de reparación del ADN.
- - Agentes genotóxicos y mecanismos de reparación del DNA
- - Reparación de dímeros de pirimidinas mediante fotoreactivación
- - Remoción de grupos metilo
- - Bases mal apareadas
- - Metilación del DNA
- - Reparación del DNA durante o después de su replicación
- - Reparación de cortes en ambas cadenas del DNA
- - Sistemas De reparación de DNA: NER (Nucleotide Excision Repair)
- - Mecanismos de reparación de DNA: BER (Base escisión Repair)
- Mutaciones del ADN, alteraciones en las proteínas que sintetizan y enfermedades asociadas.
- - Alteraciones que puede sufrir el ADN: Mismatch (mal apareamiento), Desaminación, Pérdida de bases, Unión covalente entre bases de la misma cadena, Unión de grupos alquilo, Ruptura de simple cadena (nick) y Ruptura de doble cadena
- - Alteraciones en las proteínas que se sintetizan y enfermedades asociadas. Desnaturalización
- Estructura y función de las proteínas.
- - Aminoácidos y neurotransmisores
- - Enlaces peptídicos, oligopeptidos y polipeptidos
- - Estructura primaria, secundaria , terciaría y cuaternaria
- - Funciones de las proteínas: estructural, reguladora, de transporte, de reserva, enzimática, mensajera y de receptores químicos
- Transcripción y traducción.
- - Moléculas implicadas en la transcripción y traducción de las proteínas
- - Fases de la transcripción de las proteínas
- - Fases de la traducción de las proteínas
- - Regulación de la transcripción y traducción
- Síntesis y modificación de las proteínas.
- - Moléculas implicadas en la síntesis y traducción de las proteínas
- - Fases de la síntesis de las proteínas
- - Fases de la modificación de las proteínas
- - Regulación de la síntesis y modificación de las proteínas
- Alteraciones conformacionales de las proteínas.
- - Serpinopatías
- - Proteínas priónicas
- - Neuroserpinas
- - Hemoglobina
- - Repeticiones de glutamato
- - Proteína Tau
- - Inmunoglobulinas cadenas ligeras
- - Proteína CFRT Péptido B-amiloide
- - Superóxido dismutasa
- - B2 microglobulina
UNIDAD DIDÁCTICA 4. METODOLOGÍA APLICADA A LA SEPARACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
- Electroforesis.
- - Tipos de electroforesis: unidimensionales, bidimensionales y técnicas relacionadas.
- - Separación electroforética de las proteínas séricas. Patrones de normalidad y de alteración
- - Características del material y de los reactivos. Averías o disfunciones
- Técnicas cromatográficas.
- - Características de los equipos. Condiciones de uso y mantenimiento
- - Calibración. Averías o disfunciones
- - Características del material y de los reactivos
- Técnicas de inmunodetección.
- - Inmunocitoquímica
- - Western blot
- - Inmunoprecipitación
- - Co-inmunoprecipitación
- - Pull-down
- - TUNEL
- Espectrometría de masas.
- - Fundamento y aplicaciones.
- - Características de los equipos.
- - Condiciones de uso y mantenimiento. Calibración. Averías o disfunciones.
- - Características del material y de los reactivos.
- Tecnología de microarrays y chips de proteínas.
- - Microarrays de ADN: Diseño de un microarrays de ADN. Tipos
- - Microarrays de Proteínas: Diseño de un microarrays de proteínas. Tipos
- - Microarrays de Carbohidratos: Diseño de microarrays de carbohidratos. Aplicaciones
- - Microarrays de Células
- - Microarrays de Tejidos
- - Perspectivas de mercado de los microarrays y biochips en el área de salud humana
- Bioinformática. Bases de datos de proteómica.
- - Genómica funcional
- - Relación entre la biología y la informática
- - Biochips
- - Bioinformática
- - Bibliografía
UNIDAD FORMATIVA 2. ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
UNIDAD DIDÁCTICA 1. METODOLOGÍA APLICADA AL ANÁLISIS DE ÁCIDOS NUCLEICOS
- Extracción. Purificación y análisis espectroscópico y electroforético de ácidos nucleicos.
- - Material y métodos
- Amplificación de ADN mediante PCR y variantes.
- - El ADN
- - Los enzimas
- - Los nucleótidos
- - Los cebadores
- - Limitaciones y problemas de la PCR (tamaño secuencias limitado, PCR previa, contaminación, inespecifidad de cebadores,…)
- Electroforesis y técnicas relacionadas.
- - Factores que afectan a la movilidad del ADN en el gel (masa molecular, voltaje, composición de las bases, temperatura, solución amortiguadora,…)
- - Tipos de electroforesis: PFGE (Pulsed Field Gel Electroforesis), OFAGE (Orthogonal Field Alternative Gel), FIGF (Field Inversion Gel Electroforesis), CHEF (Contour Clamped Homogeneus Electric Field), Electroforesis preparative.
- - Aplicaciones: Análisis comparativos de patrones de restricción cromosómicos, construcción de mapas cromosómicos, topología y tamaño de cromosomas, análisis de elementos extracromosómicos
- Hibridación de ácidos nucleicos.
- - Factores que influyen en la hibridación.
- - Composición de las bases.
- - Concentración de ADN/ARN y tiempos Cot y Rot
- - Concentración y tamaño de la sonda
- - Concentración ADN diana
- - Desnaturalización del ADN diana y fijación a un soporte.
- - Marcaje de una sonda monocadena
- - Hibridación: mezcla y renaturalización
- - Detección de los híbridos
- - Medio de reacción
- - Polímeros inertes
- - Tiempos de hibridación y mecanismos de detección.
- - Tipos de hibridación (soporte sólido, en fase líquida, in situ, in situ sobre cromosomas, in situ de bacterias para clonaje).
- Análisis de fragmentos de ADN.
- - Método Southerm
- - Métodos de transferencia (por capilaridad, por vacío, electroforético)
- - Aplicaciones del Método Southerm
- - Mapas de restricción
- - Detección de polimorfismos (RFLP, VNTR, STR) y deleciones.
- Secuenciación.
- - Secuenciación química, método de Maxam y Gilbert
- - Secuenciación enzimática, método de Sanger o de los dideoxinucleótidos.
- - Tipos de secuenciaciones enzimáticas (Cíclica, múltiple, automática, quimioluminiscente)
- Tecnología de microarrays y chips de ácidos nucléicos.
- - Utilidad: analizar el genoma completo de un organismo
- - Fundamento: hibridación con sondas
- - Soporte: placas microtitulación o membranas de blotting
- - Fabricación: pueden ser creados en el laboratorio o usando robótica : Macroarray: señales > 300 micras y Microarray: pocillos < 200 micras
- Aplicaciones: identificación de secuencias (genes, Mutaciones), determinación del nivel de expresión génica, descubrimiento de genes, diagnóstico de enfermedades, Farmacogenómica: desarrollo de Fármacos y Toxicogenómica: investigación Toxicológica
- Bioinformática. Bases de datos de genómica.
- - Introducción a la Bioinformática
- - Consulta de Bases de datos en biología molecular
- - Alineamiento de secuencias
- - Predicción de genes
- - Introducción a los microarrays de DNA
UNIDAD DIDÁCTICA 2. PRINCIPIOS GENERALES DE ENFERMEDADES DE BASE GENÉTICA
- Genoma: células, cromosomas y genes.
- - Definición de genoma, gen y cromosoma
- - Organización, estabilización y localización del genoma
- Estructura y función de los genes y cromosomas.
- - Estructura del ADN
- - Estructura del ARN
- - El código genético
- - Secuencias codificantes versus no codificantes
- Bases cromosómicas de la enfermedad.
- - Citogenética. El cariotipo normal en los roedores de laboratorio
- - Anomalías del número de cromosomas (Heteroploidías)
- - Anomalías de la estructura de los cromosomas
- Herencia y enfermedad: enfermedades monogénicas, patrones de herencia, enfermedades poligénicas. Susceptibilidad genética.
- - Genético
- - Congénito
- - Hereditario
- Genética de las enfermedades comunes.
- - Modelos provenientes de mutaciones espontáneas o inducidas
- - Modelos generados por transgénesis
- - Modelos generados in Vitro por manipulación de células ES
- - Modelos generados por transgénesis condicional
- Genética de la reproducción y del diagnóstico prenatal.
- - Modelos animales del desarrollo embrionario
- - Diagnóstico prenatal rápido de aberraciones cromosómicas por PCR
- - Diagnóstico citogenético
- - Diagnóstico prenatal de enfermedades hereditarias
- Diagnóstico en medicina legal y forense.
- - VNTR
- - STR
- Modelos animales de enfermedad de base genética.
- - Modelos murinos de enfermedades hereditarias simples (mendelianas): Desórdenes de la visión, de la audición, neurológicos y neuromusculares. Enfermedades de los huesos y cartílagos, de la piel y el pelo, hematológicas, inmunodeficiencias y metabólicas
- - Modelos murinos de enfermedades hereditarias complejas (multigénicas): Cáncer, obesidad, diabetes, etc.
MÓDULO 7. PREVENCIÓN DE RIESGOS LABORALES ASOCIADOS L MANEJO DE ANIMALES Y PRODUCTOS TÓXICOS Y PELIGROSOS
UNIDAD DIDÁCTICA 1. PREVENCIÓN DE RIESGOS ASOCIADOS A LA MANIPULACIÓN DE ANIMALES.
- Identificación de riesgos asociados a manipulación de animales.
- Aplicación de la ergonomía asociada al manejo de animales.
- Utilización de sistemas de barrera para prevenir la huida de animales de la instalación.
- Aplicación de técnicas de captura de animales huidos.
- Utilización de instrumentos y mecanismos de captura de animales a distancia: características y funcionamiento.
- Identificación de riesgos asociados a transmisión de enfermedades de animales, zoonosis: definición, clasificación, etiopatogenia y factores de riesgo.
- Utilización de medidas preventivas y profilácticas de zoonosis.
- Prevención de alergias en los trabajadores de una instalación de animales: definición. Factores de riesgo y predisponentes de las alergias.
- Utilización de las medidas preventivas.
- Aplicación de procedimientos normalizados de trabajo asociados a riesgos biológicos.
UNIDAD DIDÁCTICA 2. PREVENCIÓN DE RIESGOS ASOCIADOS AL USO DE PRODUCTOS, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS.
- Identificación de riesgos asociados a productos, instrumentos y equipos utilizados.
- Aplicación de la ergonomía asociada al manejo de productos, instrumentos y equipos.
- Reconocimiento e identificación de los productos peligrosos utilizados en instalaciones de animales.
- Almacenaje de productos peligrosos. Sistemas de recogida y tratamiento de residuos peligrosos.
- Actuaciones a seguir en vertidos, derrames y escapes de productos tóxicos y peligrosos.
- Reconocimiento del etiquetado de productos tóxicos y peligrosos.
- Utilización de quipos de lucha contra incendios.
- Utilización de equipos de protección individual: caracterización y tipos.
- Seguimiento de los manuales de uso de productos, instrumentos y equipos.
- Conocimiento de las rutas de evacuación en caso de emergencia.
- Reconocimiento de pictogramas de seguridad.
- Reconocimiento de la señalización de situaciones de alarma.
- Manejo de documentos de seguridad para situaciones de emergencia: medios y mecanismos de actuación.
UNIDAD DIDÁCTICA 3. PRIMEROS AUXILIOS EN SITUACIONES DE EMERGENCIA.
- Aplicación de los fundamentos de primeros auxilios.
- Actuación frente a tipos de heridas y riesgos asociados a las mismas.
- Actuaciones frente a reacciones alérgicas.
- Actuaciones frente a ataques de animales.